محیط گسترش و ساب شبیه سازی سلول هیبریدوما 杂交瘤细胞扩培及亚克隆专用培养基

产品信息 توضیحات محصول

产品名称

نام محصول

杂交瘤细胞扩培及亚克隆专用培养基

محیط گسترش و ساب کلونینگ سلول هیبریدوما

货号 Cat.No

BRS{0}}MED02

规格

مشخصات

500 میلی لیتر / £

500 میلی لیتر در بطری

产品组分

اجزاء

DMEM基础培养基:80% (体积比)

محیط پایه DMEM: 80% (v/v)

进口胎牛血清:10%(体积比)

سرم جنین گاوی (FBS، وارداتی): 10% (v/v)

条件培养基:10%(体积比)

محیط شرطی شده: 10% (v/v)

青霉素: 100 لیوان در میلی لیتر

پنی سیلین: 100 واحد در میلی لیتر

链霉素: 100 لیوان در میلی لیتر

استرپتومایسین: 100 واحد در میلی لیتر

其它添加物:单细胞增殖因子及小分子添加剂

سایر افزودنی ها: فاکتورهای تکثیر{0} تک سلولی و مکمل های مولکولی کوچک

保存条件

شرایط نگهداری

-20 درجه 保存، 有效期 18 个月.

نگهداری در دمای -20 درجه، ماندگاری 18 ماه

使用方法

دستورالعمل استفاده

培养基融化:

37 درجه 水浴融化本培养基,乙醇消毒外表面后置超净台备用;

注:本品融化后出现少量白色絮状物属正常现象،静置3-5min使其

沉至瓶底,然后吸取上清使用即可.

ذوب کردن رسانه:

محیط را در یک حمام آب 37 درجه ذوب کنید. سطح بیرونی را با اتانول 70 درصد پاک کنید و برای استفاده در یک کابینت ایمنی زیستی قرار دهید.
توجه: ظاهر شدن مقدار کمی از مواد لخته سفید رنگ پس از ذوب طبیعی است. اجازه دهید محیط به مدت 3 تا 5 دقیقه بماند تا لخته ها ته نشین شوند، سپس مایع رویی را برای استفاده جمع آوری کنید.

融合孔处理(状态良好细胞):

针对状态良好的融合孔(比如孔内培养基颜色正常或轻微发黄,且显微镜下细胞状态良好,透亮,大小正常等)可直接使用黄枪头轻轻吹打融合孔،细胞计数后按0.8-1.5cell/孔/200ul培养基铺.

مدیریت چاه های فیوژن – سلول های سالم:

برای چاه‌های همجوشی با سلول‌هایی در شرایط خوب (مثلاً، سلول‌های معمولی یا کمی زرد رنگ متوسط، سلول‌ها در زیر میکروسکوپ سالم، روشن و دارای اندازه طبیعی به نظر می‌رسند)، به آرامی با نوک پیپت زرد به بالا و پایین پیپت کنید. سلول ها را بشمارید و در محیط 200 میکرولیتری به میزان 0.8-1.5 سلول در چاهک بشمارید.

融合孔处理(状态欠佳细胞):

针对状态不太良好的融合孔(比如孔内培养基颜色酸化发黄或显微镜下细胞状态皱缩,发黑等)可选择2种方式进行后续亚克隆.

مدیریت چاه های همجوشی – سلول های غیربهینه:

برای چاه‌های همجوشی با سلول‌هایی که در شرایط نامناسب هستند (مثلاً اسیدی‌شده/زرد متوسط ​​یا سلول‌ها در زیر میکروسکوپ چروکیده، تیره به نظر می‌رسند)، دو گزینه برای ساب کلونینگ بعدی در دسترس است:

第一种方式是将融合孔细胞吸至装有1ml本培养基的24孔板内،在扩培后的第2-3日再行计数进行亚克隆铺板(0. 8-1.5cell/孔/200ul培养基)،此时融合孔细胞倍增的次数有限且细胞状态良好,非常适于亚克隆铺板;

گزینه 1: سلول ها را از چاه همجوشی به یک صفحه 24 چاهی حاوی 1 میلی لیتر از این محیط منتقل کنید. پس از 2 تا 3 روز گسترش، سلول ها را بشمارید و ساب کلونینگ را با 0.8-1.5 سلول در چاه در محیط 200 میکرولیتری انجام دهید. در این مرحله، دوبرابر شدن سلول محدود است، اما شرایط سلولی خوب است، که آن را برای ساب کلونینگ ایده آل می کند.

第2种方式是使用黄枪头小心吸弃融合孔上清,每孔补充200ul新鲜的本培养域%7 CO2静置培养3-4小时،然后取样细胞计数后进行亚克隆(0.8-1.5cell/孔/200ul培养基);

مایع رویی را با دقت با استفاده از نوک پیپت زرد از چاه فیوژن خارج کنید و 200 میکرولیتر محیط تازه در هر چاه اضافه کنید. در دمای 37 درجه، 5% CO2 به مدت 3 تا 4 ساعت انکوبه کنید. سپس از سلول ها نمونه برداری کنید، شمارش کنید و ساب کلونینگ را با 0.8-1.5 سلول در چاه در محیط 200 میکرولیتری انجام دهید.

注:使用本司"杂交瘤扩培及亚克隆专用培养基"培养后的亚克隆一般第6-8日即可开始下游检测筛选.

توجه: کلون های فرعی کشت شده با محیط گسترش سلولی هیبریدوما و ساب کلونینگ معمولاً به مرحله ای مناسب برای غربالگری یا تجزیه و تحلیل پایین دست در روزهای 6 تا 8 پس از ساب کلونینگ می رسند.