هیبریدوم فیوژن و انتخاب محیط (HAT) 杂交瘤细胞融合筛选培养基

产品信息 توضیحات محصول

产品名称

نام محصول

杂交瘤细胞融合筛选培养基 (HAT)

هیبریدوم فیوژن و انتخاب محیط (HAT)

货号 Cat.No

BRS{0}}MED01

规格

مشخصات

500 میلی لیتر / £

500 میلی لیتر / بطری

产品组分

اجزاء

DMEM 基础培养基:80% (体积比)

محیط پایه DMEM: 80% (v/v)

进口胎牛血清:10%(体积比)

سرم وارداتی جنین گاو (FBS): 10% (v/v)

条件培养基:10%(体积比)

محیط شرطی شده: 10٪ (v/v)

青霉素: 100 لیوان در میلی لیتر

پنی سیلین: 100 واحد در میلی لیتر

链霉素: 100 لیوان در میلی لیتر

استرپتومایسین: 100 واحد در میلی لیتر

次黄嘌呤 (Hypoxanthine): 100uM

هیپوگزانتین: 100 میکرومولار

胸腺嘧啶核苷 (تیمیدین): 16uM

تیمیدین: 16 میکرومولار

氨基蝶呤 (آمینوپترین):0.4uM

آمینوپترین: 0.4 میکرومولار

其它添加物:多种细胞因子(足量)及添加剂

سایر افزودنی ها: سیتوکین های مختلف (به مقدار کافی) و مکمل ها

保存条件

شرایط نگهداری

-20 درجه 保存، 有效期 18 个月.

در دمای 20- درجه نگهداری شود. ماندگاری: 18 ماه.

使用方法

دستورالعمل استفاده

培养基融化:

37 درجه 水浴融化本培养基,乙醇消毒外表面后置超净台备用;

注:本品融化后出现少量白色絮状物属正常现象،静置 3-5 دقیقه使其沉至瓶底،然后吸取上清使用即可.

ذوب کردن رسانه:

محیط را در یک حمام آب 37 درجه ذوب کنید. سطح بیرونی را با اتانول 70 درصد پاک کنید و برای استفاده در یک کابینت ایمنی زیستی قرار دهید.
توجه: ظاهر شدن مقدار کمی از مواد لخته سفید رنگ پس از ذوب طبیعی است. اجازه دهید محیط به مدت 3 تا 5 دقیقه بماند تا لخته ها در ته نشست شوند، سپس مایع رویی را برای استفاده با دقت جمع کنید.

细胞融合与接种:

使用物理(电融合)或化学(常规PEG)的方法完成细胞融合،然后使用本培养基直接重悬融合细胞,以合适的密度(电融合推荐:1E4细胞/孔-2E4 细胞/孔;PEG 融合推荐:5E4 细胞/孔-1E5 细胞/孔)和体积 (推荐:200ul/孔)和体积 (推荐:200ul/孔) 37 درجه 5% CO2 培养箱静置培养.

آمیختگی و بذردهی سلولی:

انجام همجوشی سلولی با استفاده از روش های فیزیکی (الکتروفیوژن) یا شیمیایی (PEG معمولی). سلول های ذوب شده را مستقیماً در این محیط با چگالی و حجم مناسب معلق کنید:

الکتروفیوژن: 1 × 104 - 2 × 104 سلول / چاه

همجوشی PEG: 5 × 104 - 1 × 105 سلول / چاه
حجم توصیه شده: 200 میکرولیتر/چاه در یک صفحه 96 چاهی.
برای کشت در دمای 37 درجه، 5% CO2 انکوبه کنید.

培养液更换

融合后的第 4-8 日,根据细胞生长状态进行半换液或全换液培养;

جایگزینی متوسط:

در روزهای 4 تا 8 پس از{2}} همجوشی، جایگزینی جزئی یا کامل محیط را با توجه به وضعیت رشد سلول ها انجام دهید.

克隆筛选:

当孔中细胞克隆长至合适大小后进行融合孔阳筛检测;

غربالگری کلون:

هنگامی که کلون های سلولی در چاهک ها به اندازه مناسب رسیدند، غربالگری کلون مثبت را انجام دهید.

注意事项

موارد احتیاط

本产品有一定毒性,仅用于杂交瘤细胞的筛选及培养,不可用于 培养活体动物,诊断或治疗药物用.

این محصول سمی است و فقط برای انتخاب و کشت سلول های هیبریدوما در نظر گرفته شده است. نباید برای کشت حیوانات زنده، اهداف تشخیصی یا کاربردهای درمانی استفاده شود.

本产品适用于 HGPRT 筛选系统的杂交瘤细胞的筛选培养،不适用于 TK或其它选择系统的细胞培养.本品不能用于直接培养 HGPRT 缺陷细胞 (如 NS1, SP2).

این محصول برای انتخاب و کشت سلول های هیبریدوما با استفاده از سیستم انتخاب HGPRT مناسب است. برای TK یا سایر سیستم های انتخاب قابل اجرا نیست. این محیط را نمی توان برای کشت مستقیم سلول های دارای کمبود HGPRT{2}} (مانند NS1، SP2/0) استفاده کرد.

本产品为无菌溶液، pH 7.2 ~ 7.4، 取用需在无菌条件下进行.

این محصول یک محلول استریل با pH 7.2-7.4 است. همه جابجایی ها باید در شرایط آسپتیک انجام شود.