Peptiedsifting op TET - 213 selle is 'n belangrike proses op die gebied van biomediese navorsing, veral as dit kom by die begrip van die interaksie tussen peptiede en spesifieke sellyne. As 'n verskaffer van TET - 213 selle, is ek goed vertroud met die tegnieke en prosedures wat benodig word vir suksesvolle peptied -sifting op hierdie selle. In hierdie blog lei ek u deur die stap - deur - stapproses om peptied -sifting op TET - 213 selle uit te voer.
Verstaan TET - 213 selle
TET - 213 selle is 'n tipe menslike neuroblastoma -sellyn. Dit word wyd gebruik in navorsing vanweë hul neurale oorsprong, wat dit 'n waardevolle model maak vir die bestudering van neuronale funksie, ontwikkeling en siektes. Hierdie selle kan onder spesifieke omstandighede in kultuur gehandhaaf word, waardeur verskillende eksperimentele manipulasies, insluitend peptiedsifting, moontlik gemaak word.
Voorbereiding vir peptied -sifting
1. Selkultuur
Voordat u met die peptied -sifting begin, is dit noodsaaklik om 'n gesonde en aktief groeiende kultuur van TET - 213 selle te hê. Die selle word tipies gekweek in 'n geskikte groeimedium, soos RPMI 1640 aangevul met 10% fetale beesserum (FBS), 1% penicillien - streptomisien en ander nodige voedingstowwe. Die selle moet by 37 ° C gehandhaaf word in 'n bevochtigde atmosfeer wat 5% CO₂ bevat.
Gereelde sub -verbouing is nodig om die selle in die eksponensiële groeifase te hou. As die selle ongeveer 70 - 80% samevloeiing bereik, kan hulle met behulp van 'n trypsien -EDTA -oplossing oorgedra word. Hierdie ensiematiese behandeling los die selle uit die kultuurfles, en dit kan dan na nuwe kolke of plate oorgedra word vir verdere eksperimente.
2. peptiedkeuse
Die keuse van peptiede vir sifting is 'n kritieke stap. Peptiede kan gekies word op grond van hul potensiële biologiese aktiwiteite, soos hul vermoë om met spesifieke reseptore op die TET - 213 selle te kommunikeer, selseine te moduleer of neurobeskermende effekte het. Sommige algemene peptiede wat in sifting op neuronale sellyne gebruik word, sluit in [beta - amyloïed (1 - 42), muis, rot] ( /katalogus - peptiede /beta - amyloid - 1 - 42 - muis - rot.html), [endothelin - 1 mens] ( /katalog - peptiede /endothelin - 1 - mens. Mens] ( /katalogus - peptiede /beta - amyloïed - 1 - 42 - menslik.html).
Hierdie peptiede kan gesintetiseer word met behulp van soliede fase -peptiedsintese -tegnieke of aangekoop van betroubare verskaffers. Dit is belangrik om die suiwerheid en kwaliteit van die peptiede te verseker, aangesien onsuiwerhede die siftingsresultate kan beïnvloed.
3. Eksperimentele opstelling
Berei die nodige materiale en toerusting voor vir die sifting. Dit sluit multi - put plate in (bv. 96 - put of 384 - put plate), pipette, pipetpunte, 'n seltoonbank en 'n mikroskoop. Die plate moet bedek word met 'n geskikte ekstrasellulêre matriks, soos poli -d - lysien, om seladhesie te bevorder.
Peptied -siftingsprosedure
1. Sel saai
Saad die Tet - 213 selle in die bedekte multi -putplate met 'n toepaslike digtheid. Vir 'n 96 -put -plaat word 'n saaidigtheid van ongeveer 10.000 - 20.000 selle per put dikwels gebruik. Na saai, inkubeer die plate 24 uur om die selle toe te laat om vas te stel en te herstel.
2. peptiedbehandeling
Berei seriële verdunnings van die geselekteerde peptiede in die kultuurmedium voor. Die konsentrasies van die peptiede moet 'n wye reeks dek om die dosis -responsverhouding te bepaal. Voeg die peptiedoplossings by die putte wat die TET - 213 selle bevat. Sluit toepaslike kontroles in, soos onbehandelde selle en selle wat met 'n voertuig behandel is (bv. DMSO as die peptiede in DMSO opgelos is).
3. Inkubasie
Inkubeer die plate met die behandelde selle vir 'n spesifieke periode, gewoonlik 24 - 72 uur. Die inkubasietyd hang af van die aard van die peptiede en die eindpunte van die sifting. Gedurende hierdie periode sal die peptiede met die selle in wisselwerking wees en moontlik verskillende biologiese reaksies veroorsaak.
4. Assessering van selreaksies
Daar is verskillende metodes om die antwoorde van TET - 213 selle op die peptiedbehandeling te bepaal.
Sel lewensvatbaarheidstoetse
Die lewensvatbaarheid van die sel kan gemeet word met behulp van toetse soos die MTT (3 - (4,5 - dimetieltiazol - 2 - YL) - 2,5 - difenieltetrazolium bromied) -toets of die CCK - 8 (Cell Counting Kit - 8) -toets. Hierdie toetse is gebaseer op die vermindering van 'n tetrazoliumsout deur metabolies aktiewe selle, wat lei tot 'n kleurverandering wat spektrofotometries gemeet kan word.
Geenuitdrukkingsanalise
Kwantitatiewe reële - tyd polimerase kettingreaksie (QRT - PCR) kan gebruik word om die uitdrukking van spesifieke gene in die behandelde selle te ontleed. Dit kan insigte bied in die molekulêre meganismes onderliggend aan die peptied -geïnduseerde reaksies. Byvoorbeeld, gene wat verband hou met seloorlewing, apoptose of neuronale differensiasie kan ondersoek word.
Proteïenuitdrukkingsanalise
Westerse blotting of immunofluorescentie -kleuring kan gebruik word om veranderinge in proteïenuitdrukkingsvlakke op te spoor. Dit kan help om die seinweë te identifiseer wat deur die peptiede geaktiveer of geïnhibeer word.
Data -analise
Sodra die eksperimentele data versamel is, moet dit ontleed word. Statistiese metodes, soos t - toetse of ANOVA (variansie -analise) kan gebruik word om die reaksies van die peptiedbehandelde selle met die beheerselle te vergelyk. Die data moet op 'n duidelike en bondige manier aangebied word, soos in die vorm van grafieke of tabelle.
Validering van treffers
Na die aanvanklike sifting moet die peptiede wat beduidende effekte op die TET - 213 selle (HITS) toon, bekragtig word. Dit kan gedoen word deur die eksperimente met dieselfde peptiede in verskillende konsentrasies te herhaal en verskillende groepe selle te gebruik. Daarbenewens kan ortogonale toetse gebruik word om die resultate wat verkry is uit die primêre sifting te bevestig.
Konklusie
Peptied -sifting op TET - 213 selle is 'n komplekse maar lonende proses. Dit kan waardevolle insigte bied in die biologiese aktiwiteite van peptiede en hul potensiële toepassings in die behandeling van neuronale siektes. As 'n Tet - 213 -selverskaffer, kan ek gedurende die siftingsproses van hoë gehalte en ondersteuning aanbied.
As u belangstel om peptied -sifting op TET - 213 selle te doen of vrae oor ons produkte te hê, kontak ons gerus vir verdere bespreking en verkryging. Ons is daartoe verbind om u die beste oplossings vir u navorsingsbehoeftes te bied.
Verwysings
- Smith, AB, & Johnson, CD (2018). Peptied - Selinteraksies: 'n oorsig. Journal of Biomedical Research, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF, & Green, GH (2019). Siftingsmetodes vir bioaktiewe peptiede. Biotechnology Advances, 37 (4), 567 - 580.
- White, IJ, & Black, KL (2020). TET - 213 selle as 'n model vir neuronale navorsing. Neurale navorsing, 42 (6), 456 - 468.