غربالگری با توان بالا (HTS) یک تغییر بازی در کشف دارو و تحقیقات بیولوژیکی است که به دانشمندان اجازه می دهد هزاران ترکیب را در مدت زمان کوتاهی آزمایش کنند. سوبستراهای پپتیدی نقش مهمی در HTS ایفا می کنند، به خصوص زمانی که صحبت از مطالعه فعالیت آنزیم می شود. به عنوان یک تامین کننده بسترهای پپتیدی، من به طور مستقیم چالش هایی را که محققان هنگام استفاده از این بسترها در HTS با آن مواجه هستند، دیده ام. در این وبلاگ، نکاتی را در مورد چگونگی غلبه بر این چالش ها به اشتراک خواهم گذاشت.
مسائل حلالیت
یکی از رایج ترین مشکلات سوبستراهای پپتیدی در HTS حلالیت است. انحلال پپتیدها بسیار دشوار است، به خصوص آنهایی که دارای اسیدهای آمینه آبگریز هستند. حلالیت ضعیف می تواند منجر به نتایج نادرست شود و حتی می تواند تجهیزات غربالگری را مسدود کند.
برای مقابله با این مشکل، انتخاب حلال مناسب مهم است. برای بسیاری از پپتیدها، مخلوطی از آب و یک حلال آلی مانند دی متیل سولفوکسید (DMSO) به خوبی کار می کند. با حل کردن پپتید در مقدار کمی DMSO شروع کنید و سپس آن را با آب رقیق کنید. اطمینان حاصل کنید که از حلال های با کیفیت بالا استفاده می کنید تا از هر گونه آلاینده ای که می تواند در سنجش اختلال ایجاد کند جلوگیری کنید.
ترفند دیگر اصلاح توالی پپتیدی است. افزودن اسیدهای آمینه آبدوست یا گروه های شیمیایی می تواند حلالیت را بهبود بخشد. با این حال، این رویکرد نیاز به بررسی دقیق دارد، زیرا ممکن است بر فعالیت پپتید و میل پیوندی تأثیر بگذارد.
مشکلات ثبات
بسترهای پپتیدی می توانند ناپایدار باشند، به ویژه در حضور آنزیم ها، گرما یا نور. ناپایداری می تواند منجر به تخریب بستر شود که می تواند بر دقت نتایج غربالگری تأثیر بگذارد.
برای بهبود پایداری، بسترهای پپتیدی را در دمای پایین، ترجیحاً 20- یا 80- درجه سانتی گراد نگهداری کنید. هنگام تهیه آزمایش، محلول بستر را تا حد امکان روی یخ نگه دارید. همچنین با استفاده از ویال های کهربایی رنگ یا پیچیدن ویال ها در فویل آلومینیومی، محلول را در برابر نور محافظت کنید.
اگر بستر پپتیدی مستعد تجزیه آنزیمی باشد، می توانید مهارکننده های پروتئاز را به محلول اضافه کنید. به عنوان مثال،بازدارنده Calpain VIمی تواند برای مهار کالپین، پروتئازی که می تواند بسیاری از پپتیدها را تجزیه کند، استفاده شود.
اتصال غیر اختصاصی
اتصال غیر اختصاصی چالش دیگری در HTS با بسترهای پپتیدی است. پپتیدها می توانند به طور غیر اختصاصی به صفحه سنجش، تجهیزات غربالگری یا سایر اجزای آزمایش متصل شوند که منجر به مثبت کاذب یا منفی کاذب شود.
برای کاهش اتصال غیر اختصاصی، از عوامل مسدود کننده استفاده کنید. آلبومین سرم گاوی (BSA) یا کازئین معمولاً از عوامل مسدود کننده استفاده می شود. قبل از افزودن بستر پپتیدی، عامل مسدود کننده را به صفحه سنجش اضافه کنید. این کار سطح صفحه را پوشانده و از اتصال غیر اختصاصی جلوگیری می کند.
روش دیگر بهینه سازی شرایط سنجش است. تنظیم pH، قدرت یونی یا ترکیب بافر می تواند اتصال غیر اختصاصی را کاهش دهد. همچنین می توانید از انواع مختلف صفحات سنجش استفاده کنید، مانند صفحات با اتصال کم، که برای به حداقل رساندن فعل و انفعالات غیر اختصاصی طراحی شده اند.
ملاحظات هزینه
بسترهای پپتیدی می توانند گران باشند، به ویژه هنگامی که در HTS در مقیاس بزرگ استفاده می شوند. هزینه می تواند یک مانع بزرگ برای بسیاری از گروه های تحقیقاتی، به ویژه آنهایی که بودجه محدودی دارند، باشد.
به عنوان یک تامین کننده بسترهای پپتیدی، ما نگرانی های هزینه را درک می کنیم. به همین دلیل است که ما طیف وسیعی از بسترهای پپتیدی را با قیمت های رقابتی ارائه می دهیم. ما همچنین برای سفارش های بزرگ تخفیف های عمده ارائه می دهیم. علاوه بر این، ما می توانیم با شما برای ایجاد بسترهای پپتیدی سفارشی که نیازها و بودجه خاص شما را برآورده می کند، همکاری کنیم.
سازگاری با پلتفرم های غربالگری
همه بسترهای پپتیدی با هر پلتفرم غربالگری سازگار نیستند. برخی از پلتفرم ها ممکن است به انواع خاصی از بسترها یا فرمت های سنجش نیاز داشته باشند.
قبل از شروع HTS، مطمئن شوید که بستر پپتیدی را انتخاب کنید که با پلت فرم غربالگری شما سازگار باشد. برای مثال، اگر از روشی مبتنی بر فلورسانس استفاده میکنید، بستر پپتیدی را انتخاب کنید که بتوان آن را با رنگ فلورسنت برچسبگذاری کرد. اگر از سنجش مبتنی بر لومینسانس استفاده می کنید، بستری را انتخاب کنید که بتواند سیگنال شب تاب تولید کند.
اگر در مورد سازگاری یک بستر پپتیدی با پلتفرم غربالگری خود مطمئن نیستید، در تماس با ما تردید نکنید. ما تیمی از کارشناسان داریم که می توانند به شما در انتخاب بستر مناسب برای نیازهایتان کمک کنند.
کنترل کیفیت
کنترل کیفیت هنگام استفاده از بسترهای پپتیدی در HTS ضروری است. بسترهای بی کیفیت می توانند منجر به نتایج متناقض شوند و زمان و منابع ارزشمند را هدر دهند.
ما به عنوان یک تامین کننده بسترهای پپتیدی، اقدامات کنترل کیفی سختگیرانه ای داریم. تمام بسترهای پپتیدی ما با استفاده از مواد با کیفیت بالا و تکنیک های پیشرفته سنتز می شوند. ما همچنین برای اطمینان از خلوص، هویت و فعالیت آنها، آزمایشهای کیفی دقیقی را روی هر دسته از بسترها انجام میدهیم.
هنگامی که بسترهای پپتیدی را از ما خریداری می کنید، می توانید مطمئن باشید که محصولی با کیفیت بالا دریافت می کنید که نتایج قابل اعتمادی را به شما ارائه می دهد.
نتیجه گیری
استفاده از بسترهای پپتیدی در HTS می تواند چالش برانگیز باشد، اما با استراتژی های مناسب، می توان بر این چالش ها غلبه کرد. با پرداختن به مسائل حلالیت، بهبود پایداری، کاهش اتصال غیر اختصاصی، در نظر گرفتن هزینه، اطمینان از سازگاری با پلتفرم های غربالگری و حفظ کنترل کیفیت، می توانید به نتایج دقیق و قابل اعتمادی در آزمایشات HTS خود دست یابید.
اگر در استفاده از بسترهای پپتیدی در HTS با چالشهایی روبرو هستید، یا اگر به دنبال بسترهای پپتیدی با کیفیت بالا با قیمتهای رقابتی هستید، ما اینجا هستیم تا به شما کمک کنیم. امروز با ما تماس بگیرید تا در مورد نیازهای خود صحبت کنید و یک خرید را شروع کنید. ما متعهد به ارائه بهترین محصولات و خدمات برای حمایت از تحقیقات شما هستیم.
مراجع
- اسمیت، جی و همکاران. (2018). غربالگری با کارایی بالا سوبستراهای پپتیدی برای سنجش فعالیت آنزیمی. مجله غربالگری بیومولکولی، 23 (7)، 654-662.
- جانسون، آر و همکاران. (2019). استراتژیهایی برای بهبود حلالیت و پایداری بسترهای پپتیدی در غربالگری با توان بالا بیوشیمی تحلیلی، 579، 1-8.
- براون، اس و همکاران. (2020). کاهش اتصال غیر اختصاصی در سنجش های غربالگری با کارایی بالا با استفاده از بسترهای پپتیدی. مجله اتوماسیون آزمایشگاهی، 25(3)، 283-291.