سلام ، علاقه مندان به سلول! من به عنوان تأمین کننده سلول TET - 213 ، من سهم منصفانه ای از تجربیات مربوط به این سلولهای منحصر به فرد داشتم. در این وبلاگ ، من می خواهم نکاتی را در مورد چگونگی حفظ زنده ماندن سلول های TET - 213 به اشتراک بگذارم.
اول از همه ، بیایید بفهمیم سلول های TET - 213 چیست. آنها نوعی خط سلولی هستند که در زمینه های تحقیقاتی مختلف ، مانند علوم اعصاب و مطالعات سرطان ، پتانسیل خوبی را نشان داده اند. اما زنده نگه داشتن آنها و لگد زدن همیشه پیاده روی در پارک نیست.
کشت سلولی
پایه و اساس حفظ هر خط سلولی یک محیط کشت مناسب است. برای سلولهای TET - 213 ، یک رسانه با کیفیت بالا ضروری است. من معمولاً توصیه می کنم از رسانه ای سرشار از مواد مغذی ضروری استفاده کنید. رسانه RPMI 1640 ، همراه با 10 ٪ سرم گاو جنین (FBS) ، پنی سیلین و استرپتومایسین ، برای من شگفتی کرده است. FBS فاکتورهای رشد و هورمونهایی را که این سلول ها برای شکوفایی نیاز دارند فراهم می کند ، در حالی که آنتی بیوتیک ها به جلوگیری از آلودگی کمک می کنند.
حتماً متوسط را به درستی ذخیره کنید. آن را در دمای 4 درجه سانتیگراد نگه دارید و از نور محافظت کنید. قبل از استفاده از آن ، آن را تا 37 درجه سانتیگراد در حمام آب گرم کنید. این دمای بدن را تقلید می کند و برای سلول ها راحت تر است.
شرایط جوجه کشی
TET - 213 سلول نسبت به محیط خود کاملاً دلپذیر هستند. آنها دوست دارند در یک فضای مرطوب با 5 ٪ Co₂ در 37 درجه سانتیگراد انکوبه شوند. این محیط از نزدیک به شرایط فیزیولوژیکی در بدن انسان شباهت دارد.
در یک دستگاه جوجه کشی خوب سرمایه گذاری کنید. باید دارای دمای پایدار و کنترل CO₂ باشد. تنظیمات و کالیبراسیون انکوباتور را به طور مرتب بررسی کنید تا همه چیز در نظم باشد. همچنین ، انکوباتور را به طور مرتب تمیز کنید تا از ایجاد آلاینده ها جلوگیری شود.
کرببینی
خرده فرهنگ یک گام مهم در حفظ زنده ماندن سلول است. هنگامی که سلول های TET - 213 به حدود 80 - 90 ٪ تلاقی می رسند ، وقت آن است که آنها را تقسیم کنیم. ابتدا محیط قدیمی را برداشته و سلول ها را با نمک بافر فسفات (PBS) بشویید تا از شر هرگونه ضایعات خلاص شوید. سپس ، محلول Trypsin - EDTA را برای جدا کردن سلول ها از فلاسک کشت اضافه کنید. فلاسک را در دمای 37 درجه سانتیگراد برای چند دقیقه انکوبه کنید تا سلول ها شروع به گردآوری و جدا شدن کنند.
پس از جدا شدن سلول ها ، محیط تازه را برای خنثی کردن تریپسین اضافه کنید. تعلیق سلول را با سرعت کم برای گلوله سلول ها سانتریفیوژ کنید. گلوله را در محیط تازه به حالت تعلیق درآورید و سلول ها را به فلاسک های کشت جدید در تراکم بذر مناسب منتقل کنید. چگالی بذر در حدود 5 سلول 10 10 درجه در سانتی متر مربع معمولاً برای سلول های TET - 213 خوب کار می کند.
نظارت بر سلامت سلول
به طور منظم نظارت بر سلامت سلولهای TET - 213 بسیار مهم است. برای بررسی مورفولوژی سلول از میکروسکوپ فاز - کنتراست استفاده کنید. سلولهای TET سالم - 213 باید از یک شکل یکنواخت برخوردار باشند و به خوبی به فلاسک متصل شوند. اگر متوجه علائم مرگ سلولی مانند سلول های شناور یا شکل سلول های غیر طبیعی هستید ، می تواند نشانه یک مشکل باشد.
همچنین می توانید یک روش زنده ماندن ، مانند سنجش طرد Trypan Blue را انجام دهید. مقدار کمی از سیستم تعلیق سلول خود را با Trypan Blue مخلوط کنید. سلولهای زنده رنگ را حذف می کنند ، در حالی که سلولهای مرده آن را بالا می برند و به رنگ آبی ظاهر می شوند. تعداد سلولهای زنده و مرده را با استفاده از هموسیتومتر برای محاسبه درصد زنده ماندن سلول بشمارید.
کیفیت معرفها
استفاده از معرفهای با کیفیت بالا غیر قابل مذاکره است. کیفیت FBS ، آنتی بیوتیک ها و سایر مواد افزودنی می تواند تأثیر قابل توجهی در زنده ماندن سلول داشته باشد. هنگام انتخاب FBS ، به دنبال دسته ای باشید که به دلیل توانایی آن در حمایت از رشد سلول آزمایش شده باشد. از استفاده از معرفها یا معرفهای منقضی شده که به طور نادرست ذخیره شده اند خودداری کنید.
برخی دیگر از عوامل مورد توجه ، پپتیدهایی هستند که می توانند در رابطه با سلول های TET - 213 استفاده شوند. به عنوان مثال ،پروتئین ملانوسیت PMEL 17 (130 - 138) (انسانی)در برخی تحقیقات مربوط به سیگنالینگ سلولی پتانسیل نشان داده است.urechistachininin iوتDynorphin A (1 - 17)همچنین پپتیدهایی هستند که می توانند در زمینه تحقیقات سلولی TET - 213 مورد بررسی قرار گیرند.
عیب یابی
اگر در حفظ زنده ماندن سلول های TET - 213 مشکلی دارید ، وحشت نکنید. در اینجا برخی از مشکلات و راه حل های متداول:
آلودگی: اگر علائم آلودگی باکتریایی یا قارچی مانند ابری در مستعمرات متوسط یا قابل مشاهده را مشاهده می کنید ، فوراً کشتهای آلوده را دور ریخته اید. انکوباتور و تمام تجهیزات را به طور کامل تمیز کنید. هنگام استفاده از سلول ها ، از تکنیک های سخت آسپتیک پیروی کنید.
رشد سلول ضعیف: اگر سلول ها به خوبی رشد نمی کنند ، محیط کشت را بررسی کنید. این ممکن است که محیط قدیمی باشد یا مکمل ها به درستی کار نمی کنند. همچنین ، اطمینان حاصل کنید که شرایط جوجه کشی صحیح است. بعضی اوقات ، تغییر جزئی در دما یا غلظت CO₂ می تواند بر رشد سلول تأثیر بگذارد.
جدا شدن: اگر سلول ها خیلی راحت در حال جدا شدن باشند ، می تواند به دلیل بیش از حد - تریپسینیزاسیون باشد. دفعه بعد جوجه کشی تریپسین را کاهش دهید. همچنین ، اطمینان حاصل کنید که محلول Trypsin - EDTA تازه است.
در نتیجه ، حفظ زنده ماندن سلولهای TET - 213 نیاز به توجه به جزئیات و درک خوب از نیازهای آنها دارد. با پیروی از این نکات ، می توانید سلولهای TET - 213 خود را سالم و مولد نگه دارید.
اگر در بازار سلول های با کیفیت بالا - 213 در بازار هستید ، دوست دارم با شما گپ بزنم. این که آیا شما یک محقق هستید که روی یک پروژه کوچک مقیاس یا یک شرکت بیوتکنولوژی بزرگ کار می کنید ، می توانم سلول های مورد نیاز خود را در اختیار شما قرار دهم. برای شروع مکالمه در مورد نیازهای خود و اینکه چگونه می توانیم با هم کار کنیم ، باشید.
منابع
- Freshney ، RI (2016). کشت سلولهای حیوانی: کتابچه راهنمای تکنیک اساسی و کاربردهای تخصصی. ویلی
- Doyle ، A. ، & Griffiths ، JB (2012). کشت سلول و بافت: روشهای آزمایشگاهی. ویلی - بلکول.