پپتیدهای کاتالوگ چگونه کمیت می شوند؟

پپتیدهای کاتالوگ چگونه کمیت می شوند؟

سلام! من تامین کننده پپتیدهای کاتالوگ هستم، و امروز می خواهم در مورد چگونگی تعیین کمیت این بچه های کوچک صحبت کنم. پپتیدها در بسیاری از زمینه ها، از تحقیقات گرفته تا پزشکی، بسیار مهم هستند و بدست آوردن کمیت دقیق بسیار مهم است.

ابتدا، اجازه دهید در مورد اینکه چرا ما حتی نیاز به تعیین کمیت پپتیدهای کاتالوگ داریم صحبت کنیم. خوب، زمانی که محققان یا افرادی در زمینه پزشکی از پپتیدها استفاده می کنند، باید بدانند دقیقاً چقدر با آنها کار می کنند. چه برای یک آزمایش آزمایشگاهی، یک کارآزمایی بالینی یا توسعه یک داروی جدید، مقادیر دقیق آن مهم است. اگر خیلی کم استفاده کنید، نتایج شما ممکن است دقیق نباشد، و اگر بیش از حد استفاده کنید، می توانید کل کار را به هم بزنید.

بنابراین، چگونه آن را انجام دهیم؟ چند روش مختلف وجود دارد، و من آنها را برای شما تجزیه می کنم.

یکی از رایج ترین روش ها طیف سنجی UV - Vis است. این روش از این واقعیت بهره می برد که پپتیدها نور ماوراء بنفش و مرئی را در طول موج های خاص جذب می کنند. اسیدهای آمینه مانند تریپتوفان، تیروزین و فنیل آلانین خاصیت جذب خاصی دارند. وقتی نور را در طول موج خاصی از طریق محلول پپتید خود می تابانیم، می توانیم میزان جذب آن نور را اندازه گیری کنیم. بر اساس مقدار جذب و ضریب انقراض شناخته شده پپتید (که مربوط به ترکیب اسید آمینه آن است)، می توان غلظت پپتید را در محلول محاسبه کرد. برای مثال، اگر یک پپتید با محتوای بالای تریپتوفان داشته باشیم، نور بیشتری را در حدود 280 نانومتر جذب می‌کند. ما از یک فرمول ساده بر اساس قانون بیر - لامبرت برای تعیین غلظت استفاده می کنیم. این یک روش نسبتا سریع و آسان است، اما محدودیت هایی دارد. آلاینده‌های موجود در محلول پپتید نیز می‌توانند نور را در طول موج‌های مشابه جذب کنند، که می‌تواند اندازه‌گیری‌های ما را از بین ببرد.

روش محبوب دیگر روش برادفورد است. این یک سنجش رنگ سنجی است که بر روی رنگی به نام Coomassie Brilliant Blue G - 250 متکی است. هنگامی که این رنگ به پپتید متصل می شود، رنگ آن تغییر می کند. سپس می‌توانیم جذب محلول رنگی را در یک طول موج مشخص (معمولاً حدود 595 نانومتر) اندازه‌گیری کنیم. مقدار تغییر رنگ متناسب با مقدار پپتید موجود در محلول است. ما یک منحنی استاندارد با استفاده از غلظت های شناخته شده یک پپتید مرجع ایجاد می کنیم و سپس جذب نمونه پپتید ناشناخته خود را با آن منحنی مقایسه می کنیم تا غلظت آن را تعیین کنیم. سنجش برادفورد بسیار حساس است، اما می‌تواند تحت تأثیر مواد خاصی در نمونه، مانند مواد شوینده یا نمک‌ها قرار گیرد.

HPLC یا کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا نیز به طور گسترده برای تعیین کمیت پپتید استفاده می شود. در HPLC، ما پپتید را از سایر اجزای نمونه بر اساس خواص شیمیایی آن، مانند آبگریزی آن جدا می کنیم. ما محلول پپتید را به یک ستون پر از یک فاز ثابت تزریق می کنیم و سپس از یک فاز متحرک (حلال مایع) برای فشار دادن پپتید از طریق ستون استفاده می کنیم. پپتیدهای مختلف با سرعت‌های متفاوتی در ستون حرکت می‌کنند، و ما می‌توانیم با استفاده از یک آشکارساز، معمولاً یک آشکارساز UV، آنها را هنگامی که از ستون خارج می‌شوند، شناسایی کنیم. با مقایسه ناحیه پیک پپتید مورد علاقه ما با نواحی پیک استانداردهای شناخته شده، می توانیم غلظت آن را محاسبه کنیم. HPLC عالی است زیرا می تواند پپتیدها را حتی در مخلوط های پیچیده جدا و کمیت کند، اما کمی زمان بر است و به تجهیزات تخصصی نیاز دارد.

اکنون، بیایید کمی در مورد برخی از پپتیدهای کاتالوگی که ارائه می کنیم صحبت کنیم. بگیرانترو هیلامباتینبه عنوان مثال. هنگامی که ما این پپتید را کمی می کنیم، از ترکیبی از این روش ها استفاده می کنیم تا دقیق ترین نتیجه را بدست آوریم. ما ابتدا از طیف سنجی UV - Vis برای بدست آوردن تخمین تقریبی از غلظت استفاده می کنیم و سپس آن را با HPLC دوبار بررسی می کنیم. به این ترتیب، ما می‌توانیم هر گونه آلاینده یا تداخل احتمالی در نمونه را در نظر بگیریم.

یکی دیگر استE[c(RGDyK)]2. این پپتید دارای برخی خواص منحصر به فرد است، و ما باید در تعیین کمیت آن دقت بیشتری داشته باشیم. سنجش برادفورد به دلیل ترکیب اسید آمینه خاص خود ممکن است بهترین انتخاب در اینجا نباشد، بنابراین ما بیشتر بر HPLC و طیف‌سنجی UV - Vis تکیه می‌کنیم.

و سپس وجود داردمزدوتاید (Lys20(N3-CH2CO-)). این یک پپتید پیچیده‌تر است و ما از یک رویکرد چند مرحله‌ای استفاده می‌کنیم. ما با UV - Vis شروع می کنیم تا یک قرائت اولیه را بدست آوریم، سپس از HPLC برای جداسازی آن از هر گونه ناخالصی و بدست آوردن کمیت دقیق تری استفاده می کنیم.

در شرکت ما، کنترل کیفیت یک معامله بزرگ است. هنگام تعیین کمیت پپتیدهای کاتالوگ خود، از پروتکل های سختگیرانه پیروی می کنیم. ما آزمایش‌های متعددی را روی هر دسته انجام می‌دهیم و نتایج خود را با مواد مرجع تأیید شده مقایسه می‌کنیم تا از صحت اطمینان حاصل کنیم. ما همچنین سوابق دقیقی از تمام داده های کمی نگه می داریم، بنابراین مشتریان ما می توانند به پپتیدهایی که می خرند اطمینان کامل داشته باشند.

اگر در بازار پپتیدهای کاتالوگ با کیفیت بالا هستید و نیاز به کمیت دقیق دارید، ما اینجا هستیم تا به شما کمک کنیم. چه محققی باشید که به دنبال پپتیدها برای آزمایش بزرگ بعدی خود است یا یک شرکت داروسازی که داروی جدیدی را توسعه می دهد، ما پپتیدهای مورد نیاز شما را داریم. تیم کارشناسان ما همیشه آماده پاسخگویی به هرگونه سوالی که ممکن است در مورد محصولات ما یا فرآیند تعیین کمیت داشته باشید، هستند. بنابراین، در تماس گرفتن و شروع گفتگو در مورد نیازهای پپتیدی خود تردید نکنید. ما آماده همکاری با شما برای یافتن بهترین راه حل برای پروژه های شما هستیم.

مراجع

1. Scopes, RK (1994). تصفیه پروتئین: اصول و تمرین اسپرینگر.
2. Skoog، DA، West، DM، Holler، FJ، & Crouch، SR (2013). مبانی شیمی تجزیه. Cengage Learning.
3. Bollag، DM، Rozycki، MD، و Edelstein، SJ (1996). روش های پروتئین ویلی - لیس.